Натуральные киллеры (NK-клетки, Natural killer cells, NK cells) — тип цитотоксических лимфоцитов, участвующих в функционировании врождённого иммунитета. Функционально NK-клетки аналогичны цитотоксическим T-лимфоцитам (T-киллерам) адаптивного иммунитета позвоночных. NK-клетки обеспечивают ответ на заражение внутриклеточными бактериями и вирусами, уничтожая инфицированные клетки, а также принимают участие в работе противоопухолевого иммунитета. В отличие от других иммунных клеток, NK-клетки распознают заражённые клетки без участия главного комплекса гистосовместимости (MHC) на их мембране, а также антител, благодаря чему ответ, опосредуемый NK-клетками, является очень быстрым

1.Перфорин+ Гранзим B
Активационные рецепторы NK-клеток узнают опухолевые клетки. Индуцируется усиленный синтезПерфорина и литических гранул, содержащих Гранзим В. Перфорин формирует поры в мембране клетки-мишени, а Гранзим В проникает в поры, индуцируя апоптоз клетки-мишени.

2-3. FasL/Fasили TRAIL/TRAIL-R
Взаимодействие “рецепторов смерти” (TRAIL-R и Fas) на поверхности клетки-мишени и их лигандов на поверхности NK-клеток (TRAIL и FasL соответственно). Это приводит к запуску апоптоза клетки-мишени.

Антитело-зависимая цитотоксичность
NK-клетки экспрессируют рецептор CD16, который распознает Fc-фрагмент IgG, и NK-клетки элиминируют опсонизированные молекулами IgG клетки-мишени.

Аутологичные (собственные) NK-клетки получают из крови самого пациента.
В результате исследований было показано, что аутологичные NK-клетки при введении пациенту не оказывают терапевтического эффекта против как гематологических, так и солидных опухолей (Guillerey et al., Sakamoto et al.,Parkhurst et al.).

Аллогенные NK-клетки получают от донора
Аллогенные NK-клетки от доноров с KIR (ингибирующие рецепторы), несоответствующим аллелям MHC I реципиента (KIR-mismatch), показывают многообещающие результаты в терапии пациентов с острым миелоидным лейкозом (AML). Это объясняется тем, что если даже опухолевые клетки пациента экспрессируют MHC I и ингибируют собственные NK-клетки пациента, то донорские NK-клетки с другими аллелями MHC I такому ингибированию не подвержены. В свою очередь, это ведет к более эффективной элиминации опухолевых клеток пациента.

Аллогенные NK-клетки
Клинические испытания с аллогеннымиNK-клетками начались недавно, поэтому пока имеется не так много данных об эффективности для различных видов онкологических заболеваний. Судя по всему, аллогенные NK-клетки потенциально эффективны в лечении широкого спектра онкологических заболеваний.
Список текущих клинических испытаний с NK-клетками:

• NCT03420963 – pediatrics tumors
• NCT03937895, NCT02854839 – carcinomas
• NCT02650648 – neuroblastoma
• NCT03539406 – ovarian cancer
• NCT03019640 – NHL
• NCT02809092 – AML
• NCT03669172 – ALL
• NCT03300492 and NCT01898793 – AML/MDS
• NCT02853903 – solid tumors
• NCT02727803 – AML, MDS, MM, etc.
• NCT01795378 – AML, ALL).

 Эффективность аллогенных NK-клеток была полностью подтверждена для терапии AML немелкоклеточного рака легкого (NCT02843204).

Сфера применения технологии

• NK-клетки способны распознавать паттерны стресс-лигандов на поверхности опухолевых клеток и лизировать их.
• Активация NK-клеток тонко регулируется балансом сигналов от активирующих и ингибирующих рецепторов на поверхности клеток.
• Некоторые опухолевые клетки способны ингибировать активацию NK-клеток. В таких случаях свои собственные (аутологичные) NK-клетки неэффективны в терапии, однако NK-клетки от донора либо пуповинные (allogeneic) не так уязвимы перед опухолевыми клетками благодаря феномену KIR-mismatch.
• Мы разработали надежную технологиюкультивации NK-клеток, благодаря которой наш продукт состоит из NK-клеток с высокой цитотоксичностью по отношению к опухолевым клеткам. Причем клетки эти клетки могут быть как в аутологичном, так и аллогенном формате.

Эффективность
Эффективность аллогенных NK-клеток выше, чем аутологичных. Их эффективность подтверждена для терапии AML и немелкоклеточного рака легкого, но также высока вероятность эффективности для терапии многих других видов онкологических заболеваний. NK-клеточную терапию можно комбинировать сингибиторами контрольных точек иммунитета и виротерапией.

Безопасность
АутологичныеNK-клетки абсолютно безопасны, поскольку являются активированными собственными клетками пациента.АллогенныеNK-клетки могут вызывать незначительные побочные эффекты, но, как правило, терапия проходит без осложнений.

Доступность:
Аллогенные NK-клетки получают при необходимости, процесс производства продукта занимает около 2 недель, но это время может сократиться, если производство NK-клеточного продукта началось заранее (это возможно, поскольку материал пациента нет требуется).
 АллоегнныеNK-клетки являются строго индивидуальным продуктом, для этого необходимо получить 50-100 мл крови пациента, после чего процесс культивирования и размножения занимает окло10-14 дней.

Контроль качества:
Фенотип NK-клеток валидируется с помощью окрашивания и FACS-анализа 7 маркеров для каждого продукта. Стерильность и отсутствие микоплазмы также тщательно контролируется.Аллогенные клетки дополнительно проверяются на отсутствие патогенных вирусов.